Reed-Sternberg細胞的基因表現支持它是由B細胞一族分化來的
Reed-Sternberg Cell Genome Expression Supports a B-Cell Lineage


出處：Blood, Vol 94, No 2(July 15),1999
譯者：洪世文


前言：
霍奇金氏病(Hodgking's disease)和其它的惡性腫瘤有一個很不同的地方，就是在它侵犯的組織中並沒有很多腫瘤細胞(Reed-Sternberg Cell)。因為它週圍的非腫瘤細胞很多(1000：1)，因此要直接萃取腫瘤細胞來決定它們的基因表現或是基因型常常失敗。在這裏，我們將採用一種以基因為主的方法來研究單一個Reed-Sternberg細胞的基因及研究它的細胞來源。 Reed-Sternberg細胞是霍奇金氏病中的一種無性生殖的、單一套染色體的、致病的細胞。一般認為Reed-Sternberg細胞具有生化的活性，它能分泌出胜肕類的物質，可以引誘週圍的發炎細胞浸潤，而產生系統性的症狀。因為它們的免疫球蛋白重鏈變異(Ig heavy chain variable)基因的重組及高度變異，我們認為Reed-Sternberg細胞是原始的生殖中心B細胞(germinal center B lymphocyte)，它帶有不生殖的免疫球蛋白的基因(non-productive Ig gene)但是不會被選擇自衰(resist culling by apoptosis)。造成霍奇金氏症的原因可能是因為感染造成的，艾伯斯丁-巴病毒(Ebstein-Barr virus，EBV)在許多Reed-Sternberg細胞中都可以找到，但並不是全部，可是艾伯斯丁-巴病毒是否是造成霍奇金氏症的原因並未確定。因為我們很難取得細胞來做研究，因此我們對它的基因表現或是細胞上的表現並不是很了解。霍奇金氏症有時候是有家族性的，而雙胞胎產生此病的危險性是一般人的100倍，但是並沒有發現其特定的基因位置。 因為缺少特殊的抗體或胺基酸探針，霍奇金氏病的基因研究只發現了大概一百個基因產物，而且缺少顯微下的研究報告。為了要完整的研究Reed-Sternberg的基因表現，我們發展出單細胞的研究方法，使得cDNA庫可以由單一的Reed-Sternberg細胞得到。我們將Reed-Sternberg細胞的cDNA庫序列與霍奇金氏症分化的細胞原發性的霍奇金氏症組織及正常細胞做比較。

方法：
細胞來源： 霍奇金氏症分化細胞(Hodgkin's-derived cell lines)：cDNA由兩個連續的細胞序列所得到，這兩個序列是由2個霍奇金氏症復發的病人所獲得而且這兩個病人有原發性的Reed-Sternberg細胞。 霍奇金氏症組織(Hodgkin's disease tissue)：兩個cDNA庫由一個結節硬化性霍奇金氏症病人的冷凍淋巴結獲得。 單一Reed-Sternberg cells：cDNA庫由之前以micropipette選擇的細胞，並以墨漬探針及特殊的PCR而得到。 生殖中心B細胞：其cDNA庫由網路上得到的腫瘤基因序構造的組織樣本CGAP123.1。 序列分析：以自動序列分析機分析，而結果則和人類將近2*106的基因序列做比較。

結果與討論：
霍奇金氏症的惡性細胞-Reed-Sternberg細胞在一百多年前就被發現了，但是並沒有做很深入的研究，因為它在淋巴組織中非常稀少。為了真接研究它的整體基因遺傳表現，我們由活著的單一的Reed-Sternberg細胞、霍奇金氏症組織及正常細胞序列得到了將近11000000個鹽基的基因表現。我們的這個實驗使我們較以前多了解了20倍以上的霍奇金氏症的基因。我們的結果顯示不論是由硬化性霍奇金氏症或是以淋巴球為主的霍奇金氏症所得到的Reed-Sternberg細胞，都是由一個不尋常的B細胞序列變化來的，這個結果是由與將近40000000個鹽基的生殖中心B細胞及樹狀細胞(dendritic cell)基因表現比較而得來的。我們得到的這些基因序列是我們了解霍奇金氏症及其診斷治療的基礎。這個研究的方法也同時提供了我們以後對於單一個疾病細胞的基因表現的研究。